AFDye 555 NHS Ester，AFDye 555 活性酯，应用于免疫荧光和分子检测

更新时间：2026-07-15

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基础参数

【中文名称】AFDye 555 琥珀酰亚胺酯、AFDye 555 活性酯

【英文名称】AFDye 555 NHS Ester、AFDye 555 Succinimidyl Ester、AFDye 555 SE

【产品纯度】≥95%

【外观性状】固体/粉末

【储存条件】-20℃以下避光干燥保存，惰性气体保护

【用途】试剂仅用于科研实验

【来源】西安强化生物科技

产品介绍

AFDye 555 NHS Ester是一种高性能橙红色荧光胺反应性标记试剂，由高性能荧光染料AFDye 555与N-羟基琥珀酰亚胺酯（NHS ester）活性基团共价连接而成，光谱特性等同于Alexa Fluor 555 NHS Ester。该试剂激发波长555 nm、发射波长565 nm，可使用488 nm或532 nm激光谱线激发，在pH 4-10范围内保持稳定荧光输出，不受酸碱环境干扰。其核心结构中的四磺酸基团赋予分子的水溶性，有效避免蛋白疏水化聚集沉淀的风险——这是相较于传统Cy3和四甲基罗丹明的本质优势。NHS酯形式使其可直接与蛋白质、抗体、多肽等生物分子表面的伯胺基团偶联，操作简洁高效。

作用机理

NHS酯基团在pH 7.0-9.0的弱碱性条件下，与蛋白质、多肽、抗体表面的伯胺基团（赖氨酸ε-氨基或N端α-氨基）发生亲核取代反应，释放N-羟基琥珀酰亚胺，同时形成稳定的酰胺键共价连接。该反应选择性高，不与巯基、羟基或羧基发生交叉反应。对于免疫球蛋白IgG等大多数抗体，摩尔吸光系数约为203,000 cm⁻¹M⁻¹，推荐F/P值（染料/蛋白摩尔比）控制在4-9之间。标记效率可通过公式计算：蛋白摩尔浓度 = (A280 − A555 × 0.08) × 稀释倍数 / 203000；F/P = A555 × 稀释倍数 / (150000 × 蛋白摩尔浓度)。

性能参数与竞品对比

AFDye 555 NHS Ester的摩尔消光系数高达150,000 cm⁻¹M⁻¹，A280/Amax仅为8%，意味着在280 nm处的背景吸收极低，标记后蛋白定量更准确。与Cy3相比：光稳定性显著更优，在活细胞和固定细胞中连续照射后信号衰减幅度小得多；水溶性更强，四磺酸结构确保染料不改变蛋白表面极性，大幅降低疏水化聚集沉淀风险。与Alexa Fluor® 555相比：光谱一致，性价比更优。与AF488搭配使用时，橙红色与绿色荧光几乎无光谱重叠，多色标记中串色问题极小，是双色乃至三色成像实验的理想组合。

应用领域

该试剂应用方向成熟且覆盖广泛：其一，免疫荧光与细胞成像，标记一抗或二抗用于组织切片观察，橙红色荧光在神经组织或肿瘤切片中能清晰衬托目标蛋白位置，与AF488组合可实现双色共定位分析；其二，流式细胞术多色分析，作为第三或第四个颜色通道，与FITC、PE、APC等经典染料光谱分离良好，补偿矩阵简洁；其三，FRET实验，可与AF647、AF680等配对作为供体或受体染料，研究蛋白-蛋白相互作用；其四，氨基修饰寡核苷酸标记，用于FISH、qPCR探针及分子信标等核酸检测技术。